(3+4),547.467.3 ФЛУОРЕСЦЕНТНОЕ МЕЧЕНИЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ЗОНДОВ TaqMan С ПОМОЩЬЮ “КЛИК”-ХИМИИ ПО РЕАКЦИИ КАТАЛИЗИРУЕМОГО Cu(I) <...> Тимакова, 2/12 Поступила в редакцию 16.07.2016 г. Принята к печати 08.08.2016 г. Предложен метод получения олигонуклеотидных зондов TaqMan, основанный на постсинтетическом “клик”-мечении азидопроизводным флуоресцеина алкинильной боковой цепи остатков пиримидинов по реакции катализируемого Cu(I) диполярного [3 + 2]-циклоприсоединения азидов и алкинов (CuAAC). <...> Олигонуклеотиды, содержащие алкинильную группу, были синтезированы с использованием разработанных авторами ранее дезоксиуридинового или дезоксицитидинового фосфитамидных мономеров. <...> Были получены олигонуклеотидные зонды TaqMan, содержащие на 3'-конце гаситель флуоресценции и в различных внутренних положениях остаток флуоресцеина. <...> Отмечено, что при сближении флуоресцентной метки с 3'-концом, несущим гаситель, эффективность гашения флуоресценции возрастает (уровень фоновой флуоресценции падает). <...> 1 Статья публикуется по материалам сообщения, представленного на конференции “Химическая биология-2016”; г. Новосибирск, 24–29 июля 2016 г. Сокращения: BHQ-1 – Black Hole Quencher 1, CuAAC – катализируемая Сu(I) реакция [3 + 2]-диполярного циклоприсоединения азидов и алкинов, CPG – стекло с контролируемым размером пор, DMTr – 4,4'-диметокситритил, DIPEA – N,N-диизопропилэтиламин, Flu – остаток 5-ациламинофлуоресцеина, HBTU – гексафторфосфат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония, MALDI-TOF – времяпролетная масс-спектрометрия c лазерной десорбционной ионизацией в присутствии матрицы, TaqMan – линейные разрушаемые олигонуклеотидные зонды, ТВТА–трис[(1-бензил-1H-1,2,3-триазол-4-ил)метил]амин, ТЕАА – ацетат триэтиламмония, ПЦР – полимеразная цепная реакция. <...> 51 Наиболее распространены зонды, несущие флуорофор на 5'-конце олигонуклеотида и гаситель флуоресценции на 3'-конце. <...> Перемещение флуорофора или гасителя от концов к внутреннему положению в олигонуклеотиде, т.е. оптимизация расстояния <...>