324–333 МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ КЛЕТКИ УДК 577.217.52 ТРАНСЛЯЦИОННАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ BVDV IRES И EMCV IRES ПРИ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЭКСПРЕССИИ С УЧАСТИЕМ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ Т7 В КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ# © 2017 г. F. <...> Etemadzadehb * aDepartment of Microbiology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran bDepartment of Virology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran cDepartment of Pharmacognosy and Pharmaceutical Biotechnology, School of Pharmacy, Kermanshah University of Medical Science, Kermanshah, Iran *e-mail: azadmanesh@pasteur.ac.ir Поступила в редакцию 14.11.2015 г. Принята к печати 03.01.2016 г. Системы цитоплазматической экспрессии на основе T7-полимеразы в клетках млекопитающих широко применяются в молекулярно-биологических исследованиях. <...> В большинстве таких систем используется сайт внутренней посадки рибосомы (internal ribosome entry site; IRES) мРНК вируса энцефаломиокардита (encephalomyocarditis virus; EMCV). <...> Для осуществления процесса кеп-независимой трансляции этому типу IRES могут потребоваться различные факторы из клетки хозяина, и это затрудняет работу с ними. <...> Другие IRES могут быть менее зависимы от клеточных факторов хозяина, но их свойства изучены в меньшей степени. <...> Нами проведено сравнение трансляционной эффективности двух IRES – из вируса диареи крупного рогатого скота (bovine viral diarrhea virus; BVDV) и из ECMV. <...> Оба IRES проанализированы в репортерных векторах, состоящих из T7-промотора, выбранного IRES и кодирующей последовательности усиленного зеленого флуоресцентного белка (enhanced green fluorescent protein; EGFP). <...> Для обеспечения экспрессии РНК-полимеразы T7 соответствующий ген выделяли из Escherichia coli и вводили его в плазмидный вектор pCDNA3.1-Hygro(+). <...> После котрансфекции этого вектора с одним из репортерных векторов в клетки линий T7-BHK (из почки новорожденного хомячка), HEK 293T (из почки эмбриона человека), CHO (из яичника китайского хомячка) и в клетки HeLa исследовали трансляционную эффективность репортерной конструкции методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии. <...> В клетках T7-BHK, HEK 293T и HeLa трансляционная эффективность BVDV IRES оказалась в 2–3 раза выше, чем EMCV IRES. <...> В клетках CHO трансляционная эффективность <...>