Национальный цифровой ресурс Руконт - межотраслевая электронная библиотека (ЭБС) на базе технологии Контекстум (всего произведений: 635050)
Контекстум
Руконтекст антиплагиат система
Микробиология  / №2 2017

МОДЕЛЬ РЕГУЛЯЦИИ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ФЕРМЕНТОВ (АМИЛАЗ) В ПОЧВЕ (200,00 руб.)

0   0
Первый авторШаненко
АвторыНиколаев Ю.А., Эль-Регистан Г.И.
Страниц12
ID593604
АннотацияСогласно современным представлениям сохранение энзиматической активности внеклеточных ферментов в почве обусловлено их стабилизацией путем иммобилизации на органических и неорганических носителях. Однако иммобилизация ферментов приводит к существенному снижению их активности. В настоящей работе выявлен механизм стимуляции каталитической активности, а также дополнительного повышения стабильности у иммобилизованных ферментов (на примере амилаз) за счет их посттрансляционной модификации с помощью низкомолекулярных соединений – алкилоксибензолов класса алкилрезорцинов, типичных для органического вещества почвы. В модельных экспериментах определены оптимальные условия сорбции амилаз на биосорбенте – дрожжевых клеточных стенках (соотношение фермента и сорбента, оптимумы рН, концентрации СаСl2 и времени сорбции), и подтверждено снижение активности иммобилизованного фермента по сравнению с растворенным. Обнаружено, что в концентрациях 1.6–80 мМ алкилрезорцины (С7АОБ) обусловливают повышение каталитической активности амилаз в вариантах их действия как на уже адсорбированный ферментный белок (на 30%), так и на свободный фермент в растворе с его последующей иммобилизацией (на 50–60%), при одинаковой оптимальной концентрации С7АОБ 16 мМ. Стабильность амилаз изучали для модифицированных (С7АОБ) и немодифицированных иммобилизованных на биосорбенте амилаз в условиях нескольких (2) циклов замораживания (–20°С)–оттаивания (4°С). При выявлении вклада модификации (С7АОБ) амилаз в повышение их стабильности установлена обратная зависимость повышения стабильности модифицированных ферментов от степени повышения их активности и более высокая стабильность у иммобилизованных модифицированных амилаз, чем у модифицированного фермента в растворе. При выявлении вклада модификации (С7АОБ) в сохранение активности иммобилизованных амилаз при многократном (4 цикла) замораживании–оттаивании обнаружено: (1) существенно большее сохранение активности у модифицированных иммобилизованных амилаз по сравнению с только иммобилизованными; (2) различия в динамике потери активности у пары сравнения, ее резкое снижение после 2-го цикла замораживания–оттаивания у только иммобилизованных амилаз до уровня более низкого (42%), чем после 4-го цикла у модифицированного иммобилизованного фермента (48%). Полученные результаты демонстрируют значимость обоих механизмов стабилизации в сохранении активности почвенных внеклеточных ферментов: иммобилизации на органических носителях и модификации конформации ферментных белков низкомолекулярными соединениями с функциями химических шаперонов
Шаненко, Е.Ф. МОДЕЛЬ РЕГУЛЯЦИИ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ФЕРМЕНТОВ (АМИЛАЗ) В ПОЧВЕ / Е.Ф. Шаненко, Ю.А. Николаев, Г.И. Эль-Регистан // Микробиология .— 2017 .— №2 .— С. 79-90 .— URL: https://rucont.ru/efd/593604 (дата обращения: 07.05.2024)

Предпросмотр (выдержки из произведения)

217–228 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ МОДЕЛЬ РЕГУЛЯЦИИ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ФЕРМЕНТОВ (АМИЛАЗ) В ПОЧВЕ © 2017 г. Е. В. Дёмкинаa, *, Е. Ф. Шаненкоb , Ю. А. Николаевa , Г. И. Эль-Регистанa aФедеральный исследовательский центр “Фундаментальные основы биотехнологии” Российской академии наук, Институт микробиологии им. <...> С.Н. Виноградского, Москва bМосковский Государственный Университет Пищевых производств, каф. бродильных производств и виноделия *e-mail: elenademkina@mail.ru Поступила в редакцию 14.06.2016 г. Согласно современным представлениям сохранение энзиматической активности внеклеточных ферментов в почве обусловлено их стабилизацией путем иммобилизации на органических и неорганических носителях. <...> Однако иммобилизация ферментов приводит к существенному снижению их активности. <...> В настоящей работе выявлен механизм стимуляции каталитической активности, а также дополнительного повышения стабильности у иммобилизованных ферментов (на примере амилаз) за счет их посттрансляционной модификации с помощью низкомолекулярных соединений – алкилоксибензолов класса алкилрезорцинов, типичных для органического вещества почвы. <...> В модельных экспериментах определены оптимальные условия сорбции амилаз на биосорбенте – дрожжевых клеточных стенках (соотношение фермента и сорбента, оптимумы рН, концентрации СаСl2 и времени сорбции), и подтверждено снижение активности иммобилизованного фермента по сравнению с растворенным. <...> Обнаружено, что в концентрациях 1.6–80 мМ алкилрезорцины (С7АОБ) обусловливают повышение каталитической активности амилаз в вариантах их действия как на уже адсорбированный ферментный белок (на 30%), так и на свободный фермент в растворе с его последующей иммобилизацией (на 50–60%), при одинаковой оптимальной концентрации С7АОБ 16 мМ. <...> При выявлении вклада модификации (С7АОБ) амилаз в повышение их стабильности установлена обратная зависимость повышения стабильности модифицированных ферментов <...>