КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 9, 2015 происходит из-за так называемого человеческого фактора. <...> В таком случае приходится останавливать работу лаборатории и проводить меры, направленные на сбор и удаление ампликонов. <...> Урацил-ДНК-гликозилаза (УДГ) представляет собой фермент, ген которого обнаружен в различных организмах от бактерий до человека. <...> Основной функцией данного фермента является выщепление остатков урацилов из молекул ДНК. <...> Идея использовать УДГ в качестве ферментативного способа борьбы с контаминацией впервые была описана в 1990 г., в дальнейшем зарубежные производители (например, RoсheDiagnostic) начали вводить УДГ во все наборы реагентов для ПЦР-диагностики. <...> Техника использования УДГ в ПЦР требует прежде всего обязательной замены тиминов (dTTP) на урацилы (dUTP) при проведении амплификации. <...> С помощью направленного мутагенеза удалось добиться того, что специфичность современных полимераз и обратных транскриптаз по встраиванию урацилов в цепь ДНК практически не отличается от специфичности к встраиванию тиминов. <...> В случае попадания такой молекулы в ПЦР повторно она амплифицироваться не будет, поскольку УДГ, содержащаяся в ПЦР, гидролизует связь между цепью ДНК и содержащимися в ней урацилами. <...> Следует отметить, что для потери способности амплифицироваться достаточно выщепления лишь одного остатка урацила из каждой цепи ДНК ампликона. <...> В то же время ДНК, выделенная из клинического материала, не содержит урацилов и, соответственно, не является субстратом для УДГ. <...> Сотрудниками ЦНИИ эпидемиологии проведен анализ баз данных по ферментам, на основании которого было принято решение произвести сборку гена из праймеров, клонировать и создать экспрессионную конструкцию для УДГтл из трески. <...> Эти свойства делают его потенциально хорошим объектом для применения в наборах реагентов для ПЦР. <...> В результате был получен штамм продуцент УДГтл в клетках E. coli с высоким уровнем экспрессии. <...> Разработанная <...>