Аналитические методы исследования гомоцистеина (187,00 руб.)

Стр.1

Стр.2

Стр.3

Стр.4

Стр.5

Стр.6

Стр.172

Стр.173

Стр.174

Стр.175

Стр.176

Стр.177

HS HO NH2 O

Стр.1

Стр.2

УДК 616 ББК 28.707 K88 Рецензенты: член-корреспондент РАН В.С. РЕПИН академик РАН В.А. ЮРКИВ Кубатиев А.А., Иванов А.В., Лузянин Б.П. Аналитические методы исследования гомоцистеина / ФГБНУ НИИ общей патологии и патофизиологии М. : Наука, 2016. – 172 с. – ISBN 978-5-02-039214-4. В монографии наряду с описанием метаболизма гомоцистеина, «редокс-статуса» тиолов, вопросов подготовки и хранения проб представлен материал по количественному определению гомоцистеина и других аминотиолов. Обсуждаются возможности применения различных реагентов с целью повышения чувствительности детектирования аминотиолов и оптимизации процесса их разделения. Работа содержит обзор опубликованных за последние десятилетия отечественных и зарубежных исследований по инструментальным методам анализа аминотиолов с использованием капиллярного электрофореза, высокоэффективной жидкостной хроматографии и применением различных видов детектирования, включая масс-спектрометрическое, флуорометрическое и УФ-детектирование. Для биохимиков, токсикологов, врачей санитарно-эпидемиологической службы и специалистов клинических лабораторий. ISBN 978-5-02-039214-4 © Кубатиев А.А., Иванов А.В., Лузянин Б.П., 2016 © ФГБНУ НИИ общей патологии и патофизиологии, 2016 © ФГУП Издательство «Наука», 2016

Стр.3

CПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 2MEA 2-меркаптоэтиламин 2MC 2-метилцистеин 4-MSA 4-малеимидилсалициловая кислота ANM анилиннафтилмалеимид ARM анилинфенилмалеимид ABD-F 4-аминосульфонил-7-фтор-2,1,3-бензоксидиазол AcABD-F 4-(N-ацетиламиносульфонил)-7-фтор-2,1,3бензоксидиазол BIPM N-[4-(2-бензимидазолил)фенил]-малеимид bHcy связанный гомоцистеин CMQTB 2-хлоро-1-метилхинолинтетрафторборат CMPI 2-хлор-1-метилпиридин иодид CSF спинномозговая жидкость Cys цистеин Cysta цистатионин Cys-Gly цистеинилглицин CV DTTI дитиотреитол DTE дитиоэритриол DTDNA DTNBA коэффициент вариации 6,6’-дитиодиникотиновая кислота 5,5’-дитио-бис(2-нитробензойная кислота) DMANSC 5-диметиламинонафталин-1-сульфонилхлорид DAM диметиламинофенилмалеимид dPA d-пеницилламин DBPM N-[4-(6-диметиламино-2-бензофуранил)фенил] малеимид DTDP DBD-F 4,4’-дитиодипиридин DACM N-(7-диметиламино-4-метил-2-оксо-3-хрометил) малеимид 4’-(N,N-диметиламиносульфонил)-7-фтор-2,1,3бензоксидиазол EDTA калиевая/натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 3

Стр.4

EOF электро-осмотический поток (ЭОП) FITC флуоресцеинизотиоцианат FM флуоресцеин-5-малеимид FPIA GC флуоресцентно-поляризационный иммуноанализ газовая хроматография (ГХ) GITC 2,3,4,6-тетра-О-ацето-β-D-глюкопиранозил изотиоцианат GSH глутатион Glu-Cys глутамилцистеин Hcy гомоцистеин ITC изотиоцианат IAF иодоацетаминофлуоресцеин МАТ метионинаденозинтрансфераза MCE меркаптоэтанол MeCys метилцистеин МEKC мицеллярный капиллярный электрофорез Met метионин mBrB монобромбиман mBrTMAB монобромтриметиламинобиман MPA 3-меркаптопропионовая кислота MPG N-(2-меркаптопропионил)глицин MS метионинсинтаза МТ метилтрансфераза MTBSTFA N-метил-N-(трет-бутил-диметилсилил)трифторацетамид MTHFR метилентетрагидрофолатредуктаза NA-Cys N-ацетилцистеин NDA 2,3-нафталиндикарбоксиальдегид NEM N-этилмалеимид NAM N-(9-акридинил)малеимид NSHBA 2-нитро-5-сульфгидрилбензойная кислота NMDG N-метил-D-глюкамин (меглумин) NPM N-(1-пиринил)малеимид NG нингидрин OPA О-фталальдегид oxHcy окисленный гомоцистеин PBS фосфатно-солевой буфер rHcy восстановленный гомоцистеин SAH S-аденозилгомоцистеин SAM S-аденозилметионин SSA сульфосалициловая кислота 4

Стр.5

SBD-F аммониум – 7-фтор-2,1,3-бензоксидиазол-4сульфонат SAMSA TBP TCEP TEA TFA TPP TCAA флуоресцеин-5((2-(и 3)-S-(ацетилмеркапто)сукцноил) амино)флуоресцеин три-n-бутилфосфин трис-(2-карбоксиэтил)фосфин триэтиламин трифторуксусная кислота трифенилфосфин TcAcABD 4(N-трихлорацетиламиносульфонил)-7-фтор-2,1,3бензоксадиазол трихлоруксусная кислота TCDI 1,1-тиокарбонилдиимидазол tHcy общий гомоцистеин АТФ аденозинтрифосфат АФК активные формы кислорода БГМТ бетаин-гомоцистеин метилтрансфераза ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография ГГЦ гипергомоцистеинемия ГМК гладкомышечные клетки ДГФК дигидрофолиевая кислота ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота ИФА иммуноферментный анализ ЛПНП липопротеины низкой плотности К(З)Э капиллярный (зонный) электрофорез (Л)ФД (лазерный) флюоресцентный детектор МС масс-спектрометрия НАДФ никотинамиддинуклеотидфосфат ТГФ тетрагидрофолат ТЛ тиолактон гомоцистеина УФ ультрафиолет(овый) ФК фолиевая кислота ХПН хроническая почечная недостаточность ЭХД электрохимический детектор

Стр.6

ОГЛАВЛЕНИЕ Список сокращений ......................................................................... ВВЕДЕНИЕ ......................................................................................... Часть I АМИНОТИОЛЫ В ОРГАНИЗМЕ Глава 1 БИОХИМИЯ АМИНОТИОЛОВ 1.1. Метаболизм гомоцистеина и его регуляция................................ 1.2. Химические свойства SH-групп тиолов ...................................... 1.3. Аминотиолы и антиоксидантная защита организма .................. 1.4. Гомоцистеин в плазме крови ....................................................... Глава 2 ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ПРОБОПОДГОТОВКИ ДЛЯ АНАЛИЗА АМИНОТИОЛОВ 2.1. Общее содержание аминотиолов ................................................. 2.2. Свободные и связанные формы аминотиолов ............................ 2.3. Оценка «редокс-статуса» аминотиолов ....................................... Глава 3 ФРАКЦИОННЫЙ АНАЛИЗ АМИНОТИОЛОВ В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ 3.1. Фракции аминотиолов в нормальной плазме ............................. 3.2. Аминотиолы плазмы при гипергомоцистеинемии ..................... 3.3. «Редокс-статус» тиолов плазмы при сердечно-сосудистых заболеваниях ................................................................................ 3.4. «Редокс-статус» тиолов плазмы при других заболеваниях (почечная недостаточность, СПИД) ........................................... 8 15 16 18 3 6 23 28 30 31 31 33 37 171

Стр.172

Часть II МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОТИОЛОВ Глава 4 МЕТОДЫ ПРЯМОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОМОЦИСТЕИНА И ДРУГИХ АМИНОТИОЛОВ 4.1. Масс-спектрометрия .................................................................... 4.2. Электрохимическое детектирование ........................................... 46 54 Глава 5 МЕТОДЫ НЕПРЯМОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОТИОЛОВ С РАЗДЕЛЕНИЕМ АНАЛИТОВ В ЖИДКОЙ ФАЗЕ .......................... 58 5.1. Основные цели дериватизации и возможности ее осуществления ........................................................................................... 5.2. Реагенты для УФ-детектирования ............................................... 5.2.1. Дисульфиды (DTNBA, DTDP) .......................................... 5.2.2. Тиокарбонилдиимидазол (TCDI) ...................................... 5.2.3. Галогениды (CMQTB, CMPI, BCPB) ................................ 5.3. Реагенты для флуоресцентного детектирования ....................... 5.3.1. N-замещенные малеимиды ................................................ 5.3.2. Биманы ................................................................................ 5.3.3. Дансилазиридин ................................................................. 5.3.4. Галогеносульфонилбензофуразаны ................................... 58 59 59 68 73 77 77 81 91 91 5.3.5. О-фталевый (OPA) и нафталеновый (NDA) диальдегиды 104 5.3.6. Производные флуоресцеина............................................... 105 5.4. Дериватизация для электрохимического детектирования ......... 111 5.5. Реагенты для МС-детектирования .............................................. 112 5.6. Аминокислотный анализатор ...................................................... 117 Глава 6 ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОТИОЛОВ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ..................................................................................... 119 Глава 7 МЕТОДЫ НЕПРЯМОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОТИОЛОВ БЕЗ РАЗДЕЛЕНИЯ ....................................................................................... 125 7.1. Колориметрическое детектирование ........................................... 125 7.2. Иммуноферментный анализ ........................................................ 128 Глава 8 МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ S-АДЕНОЗИЛМЕТИОНИНА И S-АДЕНОЗИЛГОМОЦИСТЕИНА .................................................. 130 ЗАКЛЮЧЕНИЕ .................................................................................... 140 ЛИТЕРАТУРА ...................................................................................... 142

Стр.173

Научное издание Кубатиев Аслан Амирханович Иванов Александр Владимирович Лузянин Борис Петрович АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ГОМОЦИСТЕИНА Утверждено к печати Ученым советом ФГБНУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии» Редактор Л.В. Филиппова Художник Ю.И. Духовская Художественный редактор В.Ю. Яковлев Технический редактор З.Б. Павлюк Корректоры Р.В. Молоканова, Е.Л. Сысоева, Т.А. Печко

Стр.174

Подписано к печати 20.02.2016. Формат 60 Ч 901/16. Гарнитура Таймс. Печать офсетная Усл.печ.л. 11,0. Усл.кр.-отт. 11,5. Уч.-изд.л. 12,6 Тираж 1000 экз. Тип. зак. ФГУП Издательство «Наука» 117997, Москва, Профсоюзная ул., 90 E-mail: secret@naukaran.ru www.naukaran.ru ФГУП Издательство «Наука» (Типография «Наука») 121099, Москва, Шубинский пер., 6

Стр.175

Стр.176

Стр.177