Количественные показатели растворения липидов растительного масла в хлороформе и этанольнохлороформных смесях . <...> Определение содержания в биогенных тканях креатинфосфата по фосфору . <...> Определение содержания молочной кислоты в биогенных тканях энзиматическим методом. <...> Определение активности алкогольдегидрогеназы в реакции окисления этанола по НАДН . <...> . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 477 ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ ААС — атомно-абсорбционная спектроскопия АДГ — алкогольдегидрогеназа АК — аскорбиновая кислота АлТ — аланинаминотрансфераза АльДГ — альдегиддегидрогеназа АО — антиоксиданты АОС — антиокислительная активность АсТ — аспартатаминотрансфераза АТФ — аденозинтрифосфорная кислота БАВ — биологически активные вещества б. в. — бидистиллированная вода БСА — бычий сывороточный альбумин ВЖК — высшие жирные кислоты Г6ФДГ — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа Галь3ФДГ — глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа д. в. — дистиллированная вода ДГ — дигоксин ДГКВ — дигидрокверцетин ДМСО — диметилсульфоксид ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота 2,4-ДНФ — 2,4-динитрофенол ДФПГ — дифенилпикрилгидразил ИК — инфракрасный ИНТФ — йоднитротетразолий фиолетовый КДК — кетоглутаратдегидрогеназный комплекс КРС — крупный рогатый скот ЛДГ — лактатдегидрогеназа МДА — малоновый диальдегид МДГ — малатдегидрогеназа НАД+ НАДН — никотинамидадениндинуклеотид восстановленный НАДФ+ — никотинамидадениндинуклеотид окисленный — никотинамидадениндинуклеотидфосфат окисленный НАДФН — никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный НЖК — ненасыщенные жирные кислоты ОДН — о-дианизидин (3,3′-диметоксибензидин) 11 Принятые сокращения ПДК — пируватдегидрогеназный комплекс ПОЛ — перекисное окисление липидов ПХ — пероксидаза корней хрена РНК — рибонуклеиновая кислота СДГ — сукцинатдегидрогеназа СФ — спектрофотометр ТБК — тиобарбитуровая кислота α-ТК — α-токоферол ФЭК — фотоэлектроколориметр <...>
Практикум_по_биохимии_сельскохозяйственной_продукции.pdf
УДК 581.19
ББК 28.57
Р59
Рецензенты: Верхотуров В. В. – д. б. н., профессор Иркутской ГСХА;
Попов А. А. – к. х. н., доцент Якутской ГСХА
Рогожин В. В.
Р59
Практикум по биохимии сельскохозяйственной продукции : учеб. пособие
для вузов / В. В. Рогожин, Т. В. Рогожина. — СПб. : ГИОРД, 2016. —
480 с.
ISBN 978-5-98879-172-0
Основные цели практикума — ознакомление студентов с практическими методами
биохимических исследований растительных и животных тканей, закрепление
теоретических знаний в области биохимии сельскохозяйственной продукции, развитие
экспериментальных навыков и привитие научного мировоззрения. В книге
рассматриваются биохимические методы, используемые при подготовке образцов
растительных и животных тканей к исследованию, а также способы определения
и расчета содержания биологически активных веществ в исследуемых образцах сельскохозяйственной
продукции.
Учебное пособие предназначено для студентов сельскохозяйственных вузов,
обучающихся по специальности 110900 «Технология производства и переработки
сельскохозяйственной продукции», по направлению подготовки бакалавров, а также
может быть использовано студентами биологических, технических и пищевых вузов
и научными работниками.
УДК 581.19
ББК 28.57
ISBN 978-5-98879-172-0
© ООО «Издательство „ГИОРД“», 2016
Стр.4
Оглавление
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
ВВЕДЕНИЕ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
ГЛАВА 1. ПРАВИЛА И МЕТОДЫ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ . . . . . 16
1.1. Правила техники безопасности при проведении
исследований в биохимической лаборатории . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
1.2. Физико-химические методы анализа . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
1.3. Подготовка сельскохозяйственной продукции
для биохимических исследований . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
1.4. Приготовление тканей к исследованию . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
1.5. Методы разделения биогенных молекул . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
1.6. Методы выделения субклеточных фракций. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
1.7. Методы концентрирования . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
1.8. Методы приготовления, определения и расчета
концентрации вещества в растворе . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
1.9. Методы расчета экспериментальных данных . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
1.10. Порядок записи лабораторной работы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72
ГЛАВА 2. УГЛЕВОДЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
2.1. Определение глюкозы в биологических жидкостях
о-толуидиновым методом . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
2.2. Определение глюкозы с помощью антрона . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
2.3. Определение содержания сиаловых кислот по реакции с резорцином. . . 80
2.4. Определение сиаловых кислот в биологических
жидкостях по методу Гесса . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
2.5. Определение целлюлозы (по Кюршнеру и Ганеку). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
2.6. Определение крахмала в тканях растений . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
2.7. Выделение и очистка сахарозы из сахарной свеклы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
2.8. Выделение крахмала из зерновок злаковых культур. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89
2.9. Выделение крахмала из клубней картофеля. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
2.10. Выделение гликогена из животных тканей . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91
2.11. Гидролиз гликогена. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92
2.12. Ферментативный гидролиз целлюлозы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 93
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
ГЛАВА 3. ЛИПИДЫ И ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ . . . . . . . . . . . . . 96
3.1. Растворимость липидов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
3.2. Количественные показатели растворения липидов
растительного масла в хлороформе и этанольнохлороформных
смесях . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100
3.3. Экстракция липидов из субклеточных частиц. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
5
Стр.5
Оглавление
3.4. Определение содержания общих липидов
в растительных тканях . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
3.5. Определение холестерина (метод Илька). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 104
3.6. Выделение общих липидов из мышечной ткани. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 105
3.7. Фракционирование липидов методом тонкослойной хроматографии . . . 106
3.8. Исследование перекисного окисления липидов (ПОЛ) . . . . . . . . . . . . . . 108
3.9. Определение общей антиокислительной активности (АОА) . . . . . . . . . . 109
3.10. Определение содержания водорастворимых антиоксидантов . . . . . . . . . 111
3.11. Определение общего содержания антиоксидантов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 113
3.12. Определение содержания антиоксидантов в гомогенатах тканей
по Глевинду . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117
ГЛАВА 4. АМИНОКИСЛОТЫ И БЕЛКИ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 118
4.1. Определение аминокислот с помощью нингидрина . . . . . . . . . . . . . . . . . 121
4.2. Определение содержания глутаминовой кислоты . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123
4.3. Определение содержания белка спектрофотометрическим методом . . . 125
4.4. Определение общего белка по биуретовой реакции. . . . . . . . . . . . . . . . . . 127
4.5. Метод определения белка по Лоури . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 129
4.6. Метод определения белка по Брэдфорду . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132
4.7. Определение содержания гемоглобина крови
гемоглобинцианидным методом . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 133
4.8. Определение концентрации гемоглобина (по Д. Драбкину). . . . . . . . . . . 135
4.9. Определение церулоплазмина (феррооксидазы) в плазме крови . . . . . . . 136
4.10. Метод выделения пептидов из тимуса теленка . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 138
4.11. Выделение и очистка гемоглобина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 141
4.12. Выделение фибриногена из плазмы крови. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142
4.13. Выделение яичного альбумина. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142
4.14. Получение кристаллического яичного альбумина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143
4.15. Использование метода гель-хроматографии
для определения молекулярной массы гемоглобина . . . . . . . . . . . . . . . . . 144
4.16. Изучение кислотной денатурации белков . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 146
4.17. Изучение температурной денатурации белков . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147
4.18. Кислотный гидролиз белков. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 148
4.19. Щелочной гидролиз белков . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 150
4.20. Исследование взаимодействий нативной
и денатурированных форм альбумина с кальцием . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 154
ГЛАВА 5. НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 155
5.1. Выделение и качественные реакции
на дезоксирибонуклеопротеин селезенки . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 158
5.2. Выделение ДНК из животных тканей. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159
5.3. Метод определения содержания ДНК с помощью дифениламина . . . . . 160
5.4. Метод выделения ДНК растительных тканей . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 161
5.5. Выделение РНК и ДНК фенольным методом. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 162
5.6. Выделение РНК из печени (по Шерреру) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 164
5.7. Определение содержания РНК с орцином (по Мейбаум) . . . . . . . . . . . . . 165
6
Стр.6
Оглавление
5.8. Выделение РНК из рибосом гепатоцитов печени. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 166
5.9. Гидролиз ДНК . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 167
5.10. Определение суммарного содержания нуклеиновых кислот
(по А. С. Спирину) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 168
5.11. Определение содержания пуриновых оснований . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 170
ГЛАВА 6. ЭЛЕМЕНТЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 171
6.1. Определение общего азота в растительных тканях (по А. Т. Усовичу) . . . 174
6.2. Определение фосфора ванадо-молибдатным методом . . . . . . . . . . . . . . . 176
6.3. Определение неорганического фосфора методом Фиске-Суббароу . . . . 178
6.4. Определение марганца в растительных тканях
формальдоксимным методом . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 180
6.5. Определение калия и натрия на пламенном фотометре . . . . . . . . . . . . . . 181
6.6. Определение железа роданидным методом . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 182
6.7. Определение железа с помощью 4,7-дифенил-1,10фенатролин-3,6-дисульфоновой
кислоты . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 184
6.8. Определение меди в гомогенатах тканей . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 185
6.9. Определение меди в тканях методом Шмидта
в модификации А. Г. Рахманкулова и И. А. Коптевой. . . . . . . . . . . . . . . . . 187
6.10. Определение кальция в сыворотке крови с помощью
глиоксаль-бис-2-оксианила . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 188
6.11. Определение магния в сыворотке крови с помощью
титанового желтого. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 190
6.12. Определение ионов хлора в сыворотке крови
меркуриметрическим методом. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 191
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 193
ГЛАВА 7. ВИТАМИНЫ, КОФЕРМЕНТЫ И ПИГМЕНТЫ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 194
7.1. Определение содержания аскорбиновой кислоты . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 197
7.2. Выделение и очистка дигидрокверцетина (витамина
группы Р) из лиственницы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 199
7.3. Изучение физических свойств дигидрокверцетина . . . . . . . . . . . . . . . . . . 201
7.4. Энзиматический метод получения кверцетина. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 204
7.5. Выделение убихинона (коэнзима Q) из митохондрий . . . . . . . . . . . . . . . . 206
7.6. Определение содержания убихинона . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 208
7.7. Определение содержания НАДФ+
7.8. Определение содержания НАД+
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 209
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 210
7.9. Получение вытяжки пигментов из побегов пшеницы . . . . . . . . . . . . . . . . 212
7.10. Разделение пигментов по Краусу . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 213
7.11. Количественное определение хлорофиллов и каротиноидов. . . . . . . . . . 214
7.12. Омыление хлорофиллов щелочью. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 215
7.13. Получение хлорофилла . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 216
7.14. Разделение пигментов методом бумажной хроматографии . . . . . . . . . . . 217
7.15. Получение гемина с помощью органического растворителя . . . . . . . . . . 220
7.16. Получение гемина с помощью пепсина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 221
7.17. Определение концентрации гемина . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 222
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 223
7
Стр.7
Оглавление
ГЛАВА 8. ФЕРМЕНТЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 225
8.1. Физико-химические методы исследования ферментов. . . . . . . . . . . . . . 229
8.2. Методы очистки ферментов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 254
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 269
ГЛАВА 9. МОЛЕКУЛЫ ЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ. . . . . . . . . . . . . . . . . 271
9.1. Определение АТФ и глюкозо-6-фосфата . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 274
9.2. Определение АТФ с помощью люциферазы
(по Угаровой и Бровко) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 276
9.3. Определение глутатиона в растительных тканях. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 278
9.4. Определение содержания глутатиона методом
титрования с помощью n-хлормеркурибензоата. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 279
9.5. Определение содержания в биогенных тканях
креатинфосфата по фосфору . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 281
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 282
ГЛАВА 10. МЕТАБОЛИТЫ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 283
10.1. Определение нитритов в растительных тканях . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 286
10.2. Определение нитратов в растительных тканях . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 288
10.3. Определение содержания мочевины по реакции
с диацетилмонооксимом . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 290
10.4. Определение мочевой кислоты по методу Мюллера-Зейферта . . . . . . . 291
10.5. Определение содержания креатинина по цветной реакции Яффе . . . . 292
10.6. Определение содержания креатина. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 295
10.7. Определение содержания пировиноградной кислоты
с помощью лактатдегидрогеназы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 295
10.8. Определение содержания пировиноградной кислоты
в животных тканях . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 297
10.9. Определение пировиноградной кислоты в растительных тканях . . . . . 299
10.10. Определение содержания молочной кислоты с помощью
n-оксидифенила . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 301
10.11. Определение содержания молочной кислоты в биогенных
тканях энзиматическим методом. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303
10.12. Определение фосфотриоз . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 305
10.13. Определение этанола в биологическом материале . . . . . . . . . . . . . . . . . . 307
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 309
ГЛАВА 11. МЕТАБОЛИЗМ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 310
11.1. Определение активности пероксидазы в супернатанте
зерновок пшеницы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 314
11.2. Определение активности пероксидазы по ферроцианиду калия . . . . . . 316
11.3. Определение активности алкогольдегидрогеназы в реакции
окисления этанола по НАДН . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 318
11.4. Определение активности алкогольдегидрогеназы в реакции
окисления этанола по йоднитротетразолиевому фиолетовому . . . . . . . 319
11.5. Определение активности алкогольдегидрогеназы
в реакции восстановления ацетальдегида. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 322
11.6. Определение активности альдегиддегидрогеназы . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323
11.7. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
по НАДФН. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 324
8
Стр.8
Оглавление
11.8. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
по йоднитротетразолиевому фиолетовому. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 326
11.9. Определение активности 6-фосфоглюконатдегидрогеназы . . . . . . . . . . 327
11.10. Определение активности глицерол-3-фосфатдегидрогеназы. . . . . . . . . 329
11.11. Определение активности триозофосфатизомеразы . . . . . . . . . . . . . . . . . 331
11.12. Определение активности глицеральдегид-3фосфатдегидрогеназы
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 332
11.13. Определение активности лактатдегидрогеназы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 334
11.14. Определение активности ферментов пируватдегидрогеназного
комплекса. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 336
11.15. Определение активности ферментов ПДК с помощью
йоднитротетразолиевого фиолетового . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 338
11.16. Определение активности ферментов
кетоглутаратдегидрогеназного комплекса . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 339
11.17. Определение активности глутаматдегидрогеназы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 341
11.18. Определение активности цитохромоксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 343
11.19. Определение активности сукцинатдегидрогеназы . . . . . . . . . . . . . . . . . . 345
11.20. Определение активности НАД+
11.21. Определение активности НАДФ+
-зависимой малатдегидрогеназы . . . . . 346
-зависимой
малатдегидрогеназы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 348
11.22. Определение активности нитратредуктазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 350
11.23. Определение активности аскорбатоксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 352
11.24. Определение активности полифенолоксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 353
11.25. Определение активности НАДФ+
-зависимой
изоцитратдегидрогеназы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 354
11.26. Определение активности каталазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 356
11.27. Определение активности аминотрансфераз. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 357
11.28. Определение активности гексокиназы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 360
11.29. Определение активности пируваткиназы с помощью
лактатдегидрогеназы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 361
11.30. Определение активности 3-фосфоглицераткиназы
с помощью глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы . . . . . . . . . . . . . . . 363
11.31. Определение активности креатинкиназы с помощью
сложной энзиматической системы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 366
11.32. Определение активности фосфоглюкомутазы
с помощью Г6ФДГ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 368
11.33. Определение активности щелочной фосфатазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 370
11.34. Определение активности аргиназы печени . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 372
11.35. Определение активности фруктозо-1,6-дифосфатальдолазы. . . . . . . . . 375
11.36. Определение активности глюкозофосфатизомеразы
с помощью Г6ФДГ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 377
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 379
ГЛАВА 12. ВТОРИЧНЫЕ МЕТАБОЛИТЫ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .381
12.1. Определение алкалоидов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 384
12.2. Определение стероидных гликоалкалоидов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 385
12.3. Определение стероидных (сердечных) гликозидов. . . . . . . . . . . . . . . . . . 388
12.4. Выделение и определение капсаицинов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 391
9
Стр.9
Оглавление
12.5. Выделение и определение сапонинов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 393
12.6. Определение флавоноидов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 394
12.7. Определение алкилрезорцинолов . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 396
12.8. Определение госсипола . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 398
12.9. Определение дубильных веществ в семенах. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 401
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 403
ГЛАВА 13. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЛОКА . . . . . . 404
13.1. Определение плотности молока и молочных продуктов . . . . . . . . . . . . . 407
13.2. Определение титруемой кислотности молока
и молочных продуктов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 409
13.3. Определение рН молока . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 411
13.4. Определение массовой доли влаги и сухого вещества в молоке,
сметане, мороженом, сырах, твороге и творожных изделиях . . . . . . . . . 412
13.5. Методы осаждения белково-липидных комплексов молока . . . . . . . . . 413
13.6. Выделение казеина из молока . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 418
13.7. Методы растворения липидов сливочного масла
в этиловом спирте и хлороформе. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 419
13.8. Активность химозина или ферментативного сычужного комплекса. . . 420
13.9. Качественные реакции на присутствие посторонних
соединений в молоке . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 422
13.10. Выделение лактозы из молочной сыворотки. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 424
13.11. Метод определения содержания аскорбиновой кислоты в молоке . . . . 426
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 428
ГЛАВА 14 БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫИССЛЕДОВАНИЯ МЫШЦ . . . . . . . 429
14.1. Выделение митохондрий скелетных мышц . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 430
14.2. Выделение митохондрий сердечной мышцы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 431
14.3. Выделение белков мышечной ткани . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 432
14.4. Выделение и очистка миоглобина мышц . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 433
Контрольные вопросы и задания . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 435
ПРИЛОЖЕНИЯ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 436
Приложение 1. Способы расчета содержания биогенных соединений
в исследуемых жидкостях и тканях. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 436
Приложение 2. Величины рН буферных растворов и их кислотные
и щелочные компоненты . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 439
Приложение 3. Значения молекулярных масс основных соединений. . . . . . . . . 441
Приложение 4. Основные приборы, необходимые для выполнения
биохимических исследований . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 448
СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 453
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 477
Стр.10