Кокшаров, Д.В. Смирнова, С.Г. Аббасова, Н.Н. Угарова (кафедра химической энзимологии, е-mail: nugarova@gmail.com) Методами генетической инженерии сконструирована плазмида, кодирующая ген гибридного белка, который включает ген термостабильного мутанта люциферазы светляков Luciola mingrelica (4TS) и ген, кодирующий 87 С-концевых аминокислотных остатков биотин-связывающего домена E. coli (bccp87). <...> Установлено, что при наработке гибридного белка (4TSbccp) в клетках E. coli BL21(DE3) 60% целевого белка образуется в биотинилированной форме. <...> Показано, что каталитические свойства, термостабильность и спектры биолюминесценции гибридного белка близки к свойствам исходной люциферазы. <...> Показана возможность использования комплекса гибридного белка со стрептавидином в иммуноферментном анализе для определения содержания клеток Salmonella typhimurium в интервале от 104 до 5·106 КОЕ/мл. <...> Ключевые слова: люцифераза светляков, Luciola mingrelica, гибридный белок, биотин-связывающий домен, клетки Salmonella typhimurium, стрептавидин, биотин, моноклональные антитела. <...> Люцифераза светляков (КФ 1.13.12.7), катализирующая биолюминесцентную реакцию окисления люциферина кислородом воздуха в присутствии АТФ и ионов Mg2+ [1–3] с высоким квантовым выходом [4– 5], находит широкое применение как ген-маркер [6–7], а также в АТФ-метрии и “быстрой микробиологии” [8–9]. <...> Идея использования люциферазы в качестве ферментной метки в иммуноферментном анализе (ИФА) привлекательна, однако в течение долгого времени сталкивалась с затруднениями из-за низкой термостабильности и инактивации фермента при попытке его химической модификации. <...> Биотинилирование люциферазы стало возможным при гибридизации фермента с биотинсвязывающими доменами. <...> Биотинсвязывающие домены содержатся в таких белках, как ацетилкокарбоксилаза и пируваткарбоксилаза, имеющих в активном центре остаток лизина, способный образовывать амидную связь с биотином при помощи биотин-лигазы [17]. <...> Таким образом, биотинилирование белков, коньюгированных <...>