16 УДК 577.214.37 ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ДНК, РАСПОЛОЖЕННЫЕ ПЕРЕД ГЕНОМ 4,5 SН РНК, МОГУТ ОКАЗЫВАТЬ ВЛИЯНИЕ НА ЕГО ТРАНСКРИПЦИЮ РНК-ПОЛИМЕРАЗОЙ III IN VITRO И В ЖИВОЙ КЛЕТКЕ А.П. <...> В.А. Энгельгардта РАН; Лаборатория эволюции геномов эукариот; e-mail: panikoval@yandex.ru) Данная работа посвящена изучению влияния последовательностей, прилегающих к гену 4,5SH РНК мыши, на его транскрицию РНК-полимеразой III. <...> Ген 4,5SH РНК содержит внутренний промотор, однако мы обнаружили, что различные 5´-прилегающие последовательности могут как ингибировать его транскрипцию, так и обеспечивать ее высокую эффективность в системе in vitro. <...> Требования к структуре фланкирующих ген последовательностей в живой клетке оказались выше — только 5´-прилегающая последовательность из генома мыши оказалась способна обеспечивать эффективную транскрипцию гена 4,5SH РНК. <...> Данная работа посвящена 4,5SН РНК — одной из некодирующих РНК грызунов, имеющей значительную гомологию с 7SL РНК-родственными ретропозонами грызунов (В1-элемент) и приматов (Aluэлемент). <...> Известно, что в геноме мыши длинная (около 4 т.п.н.) последовательность, содержащая ген 4,5SН РНК, образует кластер из 500 тандемно организованных повторов [4]. <...> Функции данной РНК остаются неизвестными, хотя показано, что 4,5SН РНК ассоциирована с поли(А)-содержащими молекулами РНК в живой клетке [4] и взаимодействует с девятью различными клеточными белками in vitro [5]. <...> Целью работы было определить роль последовательностей, прилегающих к гену 4,5SН РНК в его транскрипции. <...> Материалы и методы Генетические конструкции получали с помощью ПЦР с дальнейшим клонированием в вектор pGEM-T (Promega) по протоколу фирмы-производителя. <...> Транскрипцию in vitro осуществляли согласно методу, предложенному Weil et al. <...> [6], используя экстракт клеток асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ). <...> Трансфекцию клеток линии HeLa вели с помощью ExGen 500 in vitro Transfection Reagent (Fermentas) по протоколу фирмы-производителя в течение 20 ч. <...> Результаты Значение 5´-фланкирующих последовательностей для транскрипции <...>